, 1          目地,創建無菌車間落菌檢測規范操作流程，標準無菌車間落菌的檢驗。, 2          范疇,適用無菌車間（包含凈化工作臺）落菌的檢測和自然環境認證。, 3          崗位職責,QA、QC工作人員閱簽。, 4          內容,4.1    參照規范：GB/T 16293-2010,4.2    測試標準,本測試標準為記數濃度值法，即根據搜集飄浮在空氣中的潛在性顆粒于專業的培養液（挑選能確認其可以適用微生物菌種生長發育的培養液），經多個時間和適合的生長發育標準讓其繁育到由此可見的菌落計數，以判斷該無菌車間的微生物菌種濃度值。,4.3    測試設備、輔助機器設備和培養液,落菌采樣器、細胞培養皿（采用與儀器設備相一致的細胞培養皿）、培養液、恒溫培養箱、髙壓滅菌設備。,4.4    測試狀態及檢測時間,4.4.1   靜態數據和動態性二種情況均可開展檢測，靜態數據檢測時，房間內測試工程師不可超過兩人。,4.4.2   在靜態數據a檢測時，單邊流無菌車間（區），檢測在空調凈化系統軟件一切正常運作時間不少于十分鐘后逐漸；非單邊流無菌車間（區），檢測在空調凈化系統軟件一切正常運作不少于三十分鐘后逐漸。在靜態數據b檢測時，單邊流無菌車間（區），檢測在生產制造實際操作工作人員撤出當場并歷經十分鐘自凈作用后逐漸；非單邊流無菌車間（區），檢測在生產制造實際操作工作人員撤出當場并歷經二十分鐘自凈作用后逐漸。,4.5    取樣點的明確,4.5.1   至少取樣點數量見表1，每一次最少取樣量見表2。,表1 至少取樣點數量,  ,表2 最少取樣量, ,4.5.2   取樣點部位布局宜務求勻稱，防止取樣點在部分地區過度稀少，取樣點依照《潔凈區環境監控管理規程》配件×××生產車間 潔凈度等級檢測取樣點布局的規定布局，每一個取樣點一般取樣一次。,4.5.3   工作區域取樣點部位距地0.8米~1.5m上下（稍高于工作臺面），正壓送風口測量點部位離去排風面三十厘米上下，可在主要設備或重要工作中主題活動范疇處提升測量點。,4.6    檢測提前準備,4.6.1   采樣器在進到被測地區前先清理表層，隨后用75%醫用酒精消毒一遍或儲放于被測地區內，與被檢測地區一起消毒殺菌（用以A級無菌車間的采樣器務必事先放到被測屋子里）。,4.6.2   A/B級區選用一次性細胞培養皿，其他地區按無菌操作原則規定，在中檢室凈化工作臺上提早制取塑造預留（將殺菌后的培養液用水浴融解，制冷至約50-60℃，Φ90mm細胞培養皿每一個竭盡約20ml培養液，Φ150mm培每一個竭盡約30ml培養液），細胞培養皿蓋上后在室內溫度下發至凝結。自做好的細胞培養皿在無菌車間內儲放不超過兩天，2~8℃儲存的細胞培養皿一般不超過1周，一次性細胞培養皿在標明的有效期限內應用，到期不可應用。,4.6.3   A/B級區應用的細胞培養皿在地區消毒殺菌前一次性傳到，隨自然環境一起消毒殺菌，在消毒劑拿取間鐵架子上儲存，在有效期限內應用。如要臨時性傳到，則務必在前一天臭氧殺菌前根據C級與B級不銹鋼傳遞窗傳到B級區開展臭氧殺菌，第二天應用。傳到前表層也務必用75%酒精擦拭。其他地區用細胞培養皿按物件傳到規定當日傳到應用。,4.6.4   取樣前，先用75%乙醇清理采樣器的機蓋、輪盤及其外罩的內外邊（FKC型蜉蝣氣體塵菌采樣器用乙醇清理取樣頭）。,4.6.5   檢測具體步驟見“JYQ-Ⅱ型落菌采樣器規范操作流程或FKC-1型蜉蝣氣體塵菌采樣器規范操作流程”。,4.6.6   取樣完畢后，蓋上細胞培養皿外蓋，在細胞培養皿上標明全部信息內容（包含產品批號，置放部位等），將細胞培養皿用適合的方法綁扎，倒放置30~35℃恒溫培養箱中塑造，塑造時間不少于2天。,4.6.7   塑造完畢后逐一查驗細胞培養皿，用人眼對細胞培養皿上全部的菌體立即記數、標識，隨后用5~10倍高倍放大鏡查驗，有無忽略。若細胞培養皿上面有兩個或兩個之上的菌體重合，可辨別時仍以兩個或兩個之上菌落計數。,4.7    檢測紀錄應包括以下幾點,4.7.1  被檢測地區名字、檢測日期、檢測根據、檢查者名字、測試設備及測試標準的敘述，檢測時需選用的情況和房間內測試工程師數，取樣點數量，檢測頻次、取樣總流量，檢測結果（包含全部統計分析測算材料）等。,4.7.2  若為動態性檢測，還應紀錄當場實際操作工作人員總數，當場機器設備運行狀況等。,4.8    結果測算,4.8.1   用記數方式 得到每個細胞培養皿的菌體數。,4.8.2   每一個測量點的落菌均值濃度計算按住式開展,
,4.9    結果鑒定,4.9.1   每一個測量點的落菌均值濃度值務必小于所選中標準中的界線。,4.9.2   在靜態數據檢測時，若某測量點的落菌均值菌濃度值超出標準，則應再次取樣2次，2次檢測結果均達標才可以判為合乎。,4.9.3   若有超出要求者，務必立即與生產制造單位聯絡，對該地區開展消毒殺菌或其他解決，隨后再次檢測至達標。,4.10 日常監管,4.10.1  落菌日常監管設糾偏裝置程度和警示程度（程度范疇及抽樣次數見《潔凈區環境監控管理規程》），以確保無菌車間（區）的微生物菌種濃度值遭受操縱，按時檢驗以查驗微生物菌種負載及其消毒液的法律效力，并且做好趨向剖析。靜態數據和動態性的監管都能夠選用該方式 。,4.10.2  針對落菌的抽樣次數，假如發生以下狀況應考慮到改動，在評定下列狀況后，也應明確別的新項目的檢驗次數,――持續超出糾偏裝置程度和警示程度；,――停產時間比預估增加；,――重要地區內發覺有環境污染存有；,――在生產制造期內，空氣過濾系統軟件開展一切重特大的檢修；,――日常操作記錄體現出選擇性的數據信息；,――消毒殺菌技術規范的更改；,――造成生物入侵的安全事故等；,――當生產線設備有重特大檢修或提升機器設備時；,――當無菌車間（區）構造或地區遍布有重特大變化時。,4.11 常見問題,4.11.1     JYQ-Ⅱ型落菌采樣器經消毒殺菌后先不放進細胞培養皿，打開落菌采樣器，使儀器設備中的殘留消毒液揮發，時間不少于五分鐘，查驗總流量并依據取樣量調節設置取樣時間。,4.11.2     單邊流無菌車間（區）或正壓送風口，采樣器取樣口房屋朝向應正對著氣旋方位，非單邊流無菌車間（區），取樣口往上。,4.11.3     檢測時務必衣著與被測地區潔凈度等級等級規定相一致并經高壓滅菌后的無菌服。,4.11.4     布局取樣點時，最少應盡可能繞開細顆粒物較集中化的送風口。,4.11.5     取樣完畢，要用75%酒精噴射采樣器外罩的內腔和輪盤（FKC型蜉蝣氣體塵菌采樣器噴涌取樣頭和維護蓋）。,4.11.6     應采用一切對策避免取樣全過程的環境污染和別的很有可能對樣版的環境污染。,4.11.7     每次培養液應該有對比實驗，檢測培養液自身是不是環境污染，可每次選中3只細胞培養皿做為對比塑造；細胞培養皿在用以檢驗時，為防止細胞培養皿運送或挪動全過程導致的危害，宜另外開展對比實驗，每一次或每一個地區取一個對比皿，與取樣皿同法實際操作但不需曝露取樣，隨后與取樣后的細胞培養皿一起放進恒溫箱中塑造，結果應無菌檢測落生長發育。,4.11.8     取樣前要認真仔細每一個細胞培養皿的品質，如發覺霉變、損壞或環境污染的應去除。,4.11.9     因為細菌種類多種多樣，區別甚大，記數時一般用散射光于于細胞培養皿反面或正臉認真觀察，不必漏計細胞培養皿邊沿生長發育的菌體，并須留意細菌菌落或培養液沉淀的差別，必需時要光學顯微鏡辨別。,4.11.10  務必按時對恒溫培養箱開展校檢。, 5          有關文檔, 6          配件, 無, 7          變動歷史時間, ,

無菌車間落菌檢測規范操作流程		序號：
起草人：	審批人：	準許人：
擬定日期：	審批日期：	準許日期：
授予單位：	公布日期：	執行日期：
派發范疇：

 

1          目地

創建無菌車間落菌檢測規范操作流程，標準無菌車間落菌的檢驗。

2          范疇

適用無菌車間（包含凈化工作臺）落菌的檢測和自然環境認證。

3          崗位職責

QA、QC工作人員閱簽。

4          內容

4.1    參照規范：GB/T 16293-2010

4.2    測試標準

本測試標準為記數濃度值法，即根據搜集飄浮在空氣中的潛在性顆粒于專業的培養液（挑選能確認其可以適用微生物菌種生長發育的培養液），經多個時間和適合的生長發育標準讓其繁育到由此可見的菌落計數，以判斷該無菌車間的微生物菌種濃度值。

4.3    測試設備、輔助機器設備和培養液

落菌采樣器、細胞培養皿（采用與儀器設備相一致的細胞培養皿）、培養液、恒溫培養箱、髙壓滅菌設備。

4.4    測試狀態及檢測時間

4.4.1   靜態數據和動態性二種情況均可開展檢測，靜態數據檢測時，房間內測試工程師不可超過兩人。

4.4.2   在靜態數據a檢測時，單邊流無菌車間（區），檢測在空調凈化系統軟件一切正常運作時間不少于十分鐘后逐漸；非單邊流無菌車間（區），檢測在空調凈化系統軟件一切正常運作不少于三十分鐘后逐漸。在靜態數據b檢測時，單邊流無菌車間（區），檢測在生產制造實際操作工作人員撤出當場并歷經十分鐘自凈作用后逐漸；非單邊流無菌車間（區），檢測在生產制造實際操作工作人員撤出當場并歷經二十分鐘自凈作用后逐漸。

4.5    取樣點的明確

4.5.1   至少取樣點數量見表1，每一次最少取樣量見表2。

表1 至少取樣點數量

總面積 m2	潔凈度等級等級
	A級	B級（靜態數據）	B級（動態性）及C級	D級
＜10	2~3	2~3	2	2
≥10~＜20	4	4	2	2
≥20~＜40	8	8	2	2
≥40~＜100	16	16	4	2
注：針對A級單邊流無菌車間（區），包含A級凈化工作臺，總面積指的是正壓送風口面積；針對D級之上的非單邊流無菌車間（區），總面積指的是屋子總面積。

 

表2 最少取樣量

潔凈度等級等級	取樣量（L/次）
A級	1000
B級（靜態數據）	1000
B級動態性及C級	500
D級	100

 

4.5.2   取樣點部位布局宜務求勻稱，防止取樣點在部分地區過度稀少，取樣點依照《潔凈區環境監控管理規程》配件×××生產車間潔凈度等級檢測取樣點布局的規定布局，每一個取樣點一般取樣一次。

4.5.3   工作區域取樣點部位距地0.8米~1.5m上下（稍高于工作臺面），正壓送風口測量點部位離去排風面三十厘米上下，可在主要設備或重要工作中主題活動范疇處提升測量點。

4.6    檢測提前準備

4.6.1   采樣器在進到被測地區前先清理表層，隨后用75%醫用酒精消毒一遍或儲放于被測地區內，與被檢測地區一起消毒殺菌（用以A級無菌車間的采樣器務必事先放到被測屋子里）。

4.6.2   A/B級區選用一次性細胞培養皿，其他地區按無菌操作原則規定，在中檢室凈化工作臺上提早制取塑造預留（將殺菌后的培養液用水浴融解，制冷至約50-60℃，Φ90mm細胞培養皿每一個竭盡約20ml培養液，Φ150mm培每一個竭盡約30ml培養液），細胞培養皿蓋上后在室內溫度下發至凝結。自做好的細胞培養皿在無菌車間內儲放不超過兩天，2~8℃儲存的細胞培養皿一般不超過1周，一次性細胞培養皿在標明的有效期限內應用，到期不可應用。

4.6.3   A/B級區應用的細胞培養皿在地區消毒殺菌前一次性傳到，隨自然環境一起消毒殺菌，在消毒劑拿取間鐵架子上儲存，在有效期限內應用。如要臨時性傳到，則務必在前一天臭氧殺菌前根據C級與B級不銹鋼傳遞窗傳到B級區開展臭氧殺菌，第二天應用。傳到前表層也務必用75%酒精擦拭。其他地區用細胞培養皿按物件傳到規定當日傳到應用。

4.6.4   取樣前，先用75%乙醇清理采樣器的機蓋、輪盤及其外罩的內外邊（FKC型蜉蝣氣體塵菌采樣器用乙醇清理取樣頭）。

4.6.5   檢測具體步驟見“JYQ-Ⅱ型落菌采樣器規范操作流程或FKC-1型蜉蝣氣體塵菌采樣器規范操作流程”。

4.6.6   取樣完畢后，蓋上細胞培養皿外蓋，在細胞培養皿上標明全部信息內容（包含產品批號，置放部位等），將細胞培養皿用適合的方法綁扎，倒放置30~35℃恒溫培養箱中塑造，塑造時間不少于2天。

4.6.7   塑造完畢后逐一查驗細胞培養皿，用人眼對細胞培養皿上全部的菌體立即記數、標識，隨后用5~10倍高倍放大鏡查驗，有無忽略。若細胞培養皿上面有兩個或兩個之上的菌體重合，可辨別時仍以兩個或兩個之上菌落計數。

4.7    檢測紀錄應包括以下幾點

4.7.1  被檢測地區名字、檢測日期、檢測根據、檢查者名字、測試設備及測試標準的敘述，檢測時需選用的情況和房間內測試工程師數，取樣點數量，檢測頻次、取樣總流量，檢測結果（包含全部統計分析測算材料）等。

4.7.2  若為動態性檢測，還應紀錄當場實際操作工作人員總數，當場機器設備運行狀況等。

4.8    結果測算

4.8.1   用記數方式 得到每個細胞培養皿的菌體數。

4.8.2   每一個測量點的落菌均值濃度計算按住式開展

4.9    結果鑒定

4.9.1   每一個測量點的落菌均值濃度值務必小于所選中標準中的界線。

4.9.2   在靜態數據檢測時，若某測量點的落菌均值菌濃度值超出標準，則應再次取樣2次，2次檢測結果均達標才可以判為合乎。

4.9.3   若有超出要求者，務必立即與生產制造單位聯絡，對該地區開展消毒殺菌或其他解決，隨后再次檢測至達標。

4.10 日常監管

4.10.1  落菌日常監管設糾偏裝置程度和警示程度（程度范疇及抽樣次數見《潔凈區環境監控管理規程》），以確保無菌車間（區）的微生物菌種濃度值遭受操縱，按時檢驗以查驗微生物菌種負載及其消毒液的法律效力，并且做好趨向剖析。靜態數據和動態性的監管都能夠選用該方式 。

4.10.2  針對落菌的抽樣次數，假如發生以下狀況應考慮到改動，在評定下列狀況后，也應明確別的新項目的檢驗次數

――持續超出糾偏裝置程度和警示程度；

――停產時間比預估增加；

――重要地區內發覺有環境污染存有；

――在生產制造期內，空氣過濾系統軟件開展一切重特大的檢修；

――日常操作紀錄體現出傾向性的數據信息；

――消毒殺菌規程的更改；

――造成生物污染的安全事故等；

――當生產設備有重特大檢修或提升機器設備時；

――當無菌室（區）構造或地區遍布有重特大變動時。

4.11 常見問題

4.11.1     JYQ-Ⅱ型落菌采樣器經消毒殺菌后先不放進細胞培養皿，打開落菌采樣器，使儀器設備中的殘留消毒液揮發，時間不少于五分鐘，查驗總流量并依據取樣量調節設置取樣時間。

4.11.2     單邊流無菌室（區）或正壓送風口，采樣器取樣口房屋朝向應正對著氣旋方位，非單邊流無菌室（區），取樣口往上。

4.11.3     檢測時務必衣著與被測地區潔凈度等級等級規定相一致并經高壓滅菌后的無菌服。

4.11.4     布局取樣點時，最少應盡可能繞開細顆粒物較集中化的送風口。

4.11.5     取樣完畢，要用75%酒精噴射采樣器外罩的內腔和輪盤（FKC型蜉蝣氣體塵菌采樣器噴涌取樣頭和維護蓋）。

4.11.6     應采用一切對策避免取樣全過程的環境污染和別的很有可能對樣版的環境污染。

4.11.7     每次培養液應該有對比實驗，檢測培養液自身是不是環境污染，可每次選中3只細胞培養皿做為對比塑造；細胞培養皿在用以檢驗時，為防止細胞培養皿運送或挪動全過程導致的危害，宜另外開展對比實驗，每一次或每一個地區取一個對比皿，與取樣皿同法實際操作但不需曝露取樣，隨后與取樣后的細胞培養皿一起放進恒溫箱中塑造，結果應無菌檢測落生長發育。

4.11.8     取樣前要認真仔細每一個細胞培養皿的品質，如發覺霉變、損壞或環境污染的應去除。

4.11.9     因為細菌種類多種多樣，區別甚大，記數時一般用散射光于于細胞培養皿反面或正臉認真觀察，不必漏計細胞培養皿邊沿生長發育的菌體，并須留意細菌菌落或培養液沉淀的差別，必需時要光學顯微鏡辨別。

4.11.10  務必按時對恒溫培養箱開展校檢。

5          有關文檔

6          配件

無

7          變動歷史時間